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　　近日，武汉大学的袁必锋教授课题组报道了一种基因组胞嘧啶羟甲基修饰单碱基测序新方法——✅双链DNA脱氨测序法（DDD-seq）。该方法利用新型双链脱氨酶SsdAcat对双链DNA中胞嘧啶以及不同修饰胞嘧啶的差异性脱氨基活性，实现对小鼠小✅脑组织基因组中5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）的单碱基测序。这一技术的建立为深入揭示5hmC的生物学意义提供了新的工具。

　　5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）是一种重要的DNA表观遗传修饰，广泛参与多种生命活动。对5h㊣mC进行精确的测序和定量分析，有助于深入理解其在基因表达调节中的作用□□、在各种生物过程中的功能，以及在疾病✅㊣发生机制中的角色。

　　本文开发了一种双链DNA脱氨测序法（DDD-seq），用于实现5hmC的单碱基分辨率测序。该方法利用外源表达的新型双链脱氨酶SsdAcat，能够高效地㊣对C□□、5mC□□□□、5caC和5fC进行脱氨基处理，而对糖基化保护的5hmC（5gmC）则不进行脱氨基，从而实现对5hmC的测序和定量分析。DDD-seq具有以下优点：（1）该方法无需亚硫酸㊣氢盐处理，有助于微量DNA中5hmC的测序分析；（2）利用SsdAcat的双链DNA脱氨酶，避免了DNA变性步骤国内基因测序仪公司，简化了操作过程，且适用于各种DNA结构，包括ssDNA□□□□、dsDNA□□、DNA/RNA杂交甚至长片段DNA；（3）SsdAcat在广泛的pH值和温度范围内表现出优异的热稳定性和活性，从而减少了反应时间和操作难度；（4）DDD-seq无序✅列偏好性，有助于对全基因✅组不同序列中的5hmC进行测序分析；（5）DDD-seq能够有效避免内源性5fC和5caC的干扰，提高了5hmC测序结果的准确性。

　　作者利用该方法绘制了小鼠小脑组织基因组中5hmC的单碱基分辨率图谱，并将其与之前的ACE-seq方法进行了对比。结果显示，两种方㊣法测得的5hmC位点及其含量之间具有良好的相关性；在DDD-seq中观察到的5hmC位点在不同染色体上的分布与ACE-seq中的分布相似。DDD-seq能够准确地在全基因组范围内定位和定量检测5hmC。此外，进一✅步利用DDD-seq揭示了慢性睡眠剥夺（CSD）对小鼠小脑组织基因组中5hmC位点的影响基因序列检测。

　　综上所述，本文开发了一种DDD-seq测序方法，能够对基因组中的5hmC进行单碱基分辨率测序分析。该方法反应温和，无需对DNA底物进行变性，具有快速□□、稳定□□、简便和适用范围广的优点。文章的第一作者为㊣武汉大学张杉博士生，共同第一作者为首都医学科学创新中心梁媛博士，通讯作者为武汉大学袁必锋教授□□□□、谢能彬博士，以及中国人民总医院慈维敏教授。该研究工作得到了国家自然科学基金和国家重点研发计划项目的支持。

　　原标题：《CCS Chemistry 武汉大学袁必锋课题组：双链DNA脱氨测序法绘制DNA羟甲基修饰单碱基分辨率全基因组图谱》